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分子生物学试剂

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详细介绍Detailed Introduction

BioRun Seamless Cloning Kit
货号:MK001-S/M/L
规格:10/20/50 rxns 
价格:咨询有惊喜哟
 
灵活多变的一体化超快速克隆试剂盒

产品描述
BioRun Seamless Cloning Kit可将1~5个片段定向重组至载体中,可有效克隆50 bp~20 kb的片段到线性化载体中。将载体通过酶切或PCR线性化,并在扩增片段正、反向PCR引物5’端引入15~25 bp同源序列,使得扩增产物之间以及扩增产物与线性化载体之间各有一段同源序列,各片段和线性化载体在重组酶的作用下,仅需50 ℃反应15~45 min即可进行转化,克隆阳性率可达95%以上。

产品特点

◆ 快速克隆:重组反应仅需15~45 min;
◆ 多片段克隆:线性化载体可有效组装1~5个片段;
◆ 高效:阳性率可达95%以上;
◆ 无缝:不引入额外的序列。
提供在线引物设计:提供在线引物设计软件(www.ftracker.net/tools/107.html

产品规格
 
储存与运输
低温运输,-20℃储存,有效期1年。

应用实例
1、pCAMBIA1300用 SacI 和 BamHI 双酶切,线性化载体大小约9 kb,装1个0.9 kb色素蛋白表达框。载体浓度为150 ng/μL,10 μL酶切体系切5 μL pCAMBIA1300,37 ℃酶切30 min,80 ℃失活20 min,片段浓度为36 ng/μL。
重组体系如下表所示:
 
50 ℃重组15 min,取3 μL转化100 μL DH5a感受态。克隆结果如图所示:蓝色斑点为正确的阳性克隆。
 
2、pCAMBIA1300用 SacI 和 BamHI 双酶切,线性化载体大小约9 kb,装3个片段。载体浓度为150 ng/μL,10 μL酶切体系切5 μL pCAMBIA1300,37 ℃酶切30 min,80 ℃失活20 min。Seg1片段1 kb,回收浓度为50 ng/μL,seg2色素蛋白表达框0.9 kb,回收浓度为38 ng/μL,seg3片段1.2 kb,回收浓度80 ng/μL。
重组体系如下表所示:
 
50℃重组30 min,取5 μL转化100 μL DH5a感受态。克隆结果如图所示:蓝色斑点为正确的阳性克隆。
 


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