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RACE技术服务

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详细介绍Detailed Introduction

 RACE技术服务

      实验原理
      RACE即cDNA末端快速克隆技术。先由RT-PCR从RNA中获取cDNA片段,再通过设计引物与PCR向两端延伸扩增从而获得完整的3'端或5'端序列,是一种从低丰度的转录本中快速扩增cDNA的5'和3’末端的有效方法。

       实验目的
       获得未知基因完整的3'端或5'端序列,找到完整的ORF开放阅读框,实现基因的正常编码。
       实验周期和流程
       客户在线下单-订单信息/实验材料确认-引物设计-PCR扩增-测序分析-获得完整的ORF阅读框

       优势特点
     (1)详细的鉴定报告
     (2)快速的实验周期

       客户下单
      项目信息填写:

      1.客户按照提示填写项目名称、选择项目类型、填写个人信息及联系方式进行预提交;
      2.序列信息:大于200bp的已知序列(请注明已知序列的5’端及3’端):如果已知序列比较短,建议先进行3’RACE再进行5’RACE,以提高实验的成功率。
      3.实验数据和相应的参考文献:这将会帮助我们更好地理解您的实验背景,更有利于实验的顺利进行。
       注:1. 请您保证材料或者总RNA新鲜,如果基因的含量较低或者未知序列较长,样品量需相应增加。
       2. 我们会根据已知序列进行特异性预扩增,如果得不到目的序列或为非目的基因的序列,我们将停止实验并收取实验成本费用;如果得到序列与您提供的序列有个别碱基不符,我们在征求您的意见后决定是否进行RACE实验。

       实验信息
       实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户,并发送实验报告查看地址。实验结题后,实验报告,检测结果可在线查看或打印,并永久保留。

       实验结果
     (1)实验报告:引物信息、实验过程、PCR产物凝胶图片、最终的完整ORF序列。
     (2)测序结果:实验相关的测序文件。



图1

       利用mRNA的3'末端的poly(A)尾巴作为一个引物结合位点,以连有SMART寡核苷酸序列通用接头引物的Oligo(dT)30MN作为锁定引物反转录合成标准第一链cDNA。然后用一个基因特异引物作为上游引物,用一个含有部分接头序列的通用引物作为下游引物,以cDNA第一链为模板,进行PCR循环,把目的基因3' 末端的DNA片段扩增出来.(图1)

图2

       利用一条基因特异性反转录引物,在反转录酶的作用下合成cDNA第一链,将RNA-DNA杂合链中的RNA降解纯化后,利用末端转移酶在cDNA链的3’端加入PolyC尾巴,然后利用锚定引物和一条基因特异性引物扩增。(图2)


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